細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程控制有點(diǎn)像走鋼絲，要在最短的時(shí)間內(nèi)，通過(guò)細(xì)胞培養(yǎng)的方法獲取更高的產(chǎn)量，則必須謹(jǐn)慎且連續(xù)地控制工藝過(guò)程中的參數(shù)；若過(guò)程管理出現(xiàn)失誤，將導(dǎo)致生產(chǎn)效率下降、運(yùn)行時(shí)間延長(zhǎng)；更糟糕的，可能會(huì)導(dǎo)致整個(gè)批次的細(xì)胞培養(yǎng)失敗。

　　你在細(xì)胞培養(yǎng)的過(guò)程中，會(huì)遇到哪些問(wèn)題

　　1、首先講一下細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢的原因：

　　a)更換了血清或者培養(yǎng)基，細(xì)胞需要一段時(shí)間適應(yīng)一下；

　　b)由于細(xì)胞的特殊種類，培養(yǎng)基中缺少某些生長(zhǎng)因子；

　　c)培養(yǎng)基中有少量真菌或者細(xì)菌污染；

　　d)傳代的時(shí)候細(xì)胞密度過(guò)低；

　　e)細(xì)胞狀態(tài)老化；

　　2、解決上述問(wèn)題的方法：

　　a)如果實(shí)驗(yàn)室沒(méi)有某種細(xì)胞最適宜的培養(yǎng)基，可以先用原培養(yǎng)條件凍存一些，然后逐漸增加新的培養(yǎng)基比例，25%、50%、75%到100%，傳代3-5次后，讓細(xì)胞慢慢適應(yīng)。

　　b)判斷是不是培養(yǎng)基發(fā)生污染，可以先不加抗生素，觀察細(xì)胞狀態(tài)。

　　c)增加細(xì)胞的接種密度。

　　d)發(fā)現(xiàn)細(xì)胞老化的時(shí)候，及時(shí)更換新的細(xì)胞。

　　e)如果懷疑是支原體污染，一定要隔離疑似污染的培養(yǎng)皿，及時(shí)清潔消毒孵箱。

　　3、造成細(xì)胞死亡的原因：

　　a)細(xì)胞消化過(guò)度；

　　b)沒(méi)有及時(shí)換液，營(yíng)養(yǎng)成分消耗殆盡；

　　c)如果前一天細(xì)胞的狀態(tài)很好，換液之后就全死了，應(yīng)該考慮是否是培養(yǎng)基或者血清的問(wèn)題。

　　4、如何判定細(xì)胞是否發(fā)生支原體污染：可以選用直接培養(yǎng)法、熒光染色或PCR方法檢測(cè)，比較常用的是PCR。當(dāng)細(xì)胞發(fā)生支原體污染時(shí)，原則上是能夠去除支原體的，但是整個(gè)過(guò)程耗時(shí)耗力，還要考驗(yàn)個(gè)人操作能力。所以如果不是處于細(xì)胞存量很少的情況下，建議發(fā)現(xiàn)污染時(shí)立刻棄掉，重新培養(yǎng)。

　　5、如果孵箱中只是某種細(xì)胞持續(xù)性大量死亡，而其他細(xì)胞狀態(tài)都沒(méi)問(wèn)題的話，基本上可以確定就是孵箱存在特異性感染這類細(xì)胞的真菌或細(xì)菌。

　　6、其他注意事項(xiàng)：每個(gè)星期都要更換孵箱底盤(pán)中的水(紫外照射后超純水)；每?jī)芍芟疽淮畏跸洌?5%酒精擦拭一遍后，再用0.1%新潔爾滅擦拭一遍(都用超純水配制)；可以在孵箱底部放一個(gè)燒杯，里面放入飽和硫酸銅，可以抑制霉菌生長(zhǎng)。不過(guò)也有人說(shuō)硫酸銅會(huì)改變孵箱的PH值，如果不是孵箱污染的情況很嚴(yán)重，建議不要使用。